HDAC1 reguliert miR-124-5p und NPY zur Modulation von Lernen und Gedächtnis in depressiven Rattenmodellen

Zusammenfassung

Forschungen zu Histondeacetylasen (HDACs) bei Depressionen wurden umfangreich durchgeführt, jedoch nur wenig zu HDAC1. Die vorliegende Studie zielt darauf ab, den Mechanismus der HDAC1/microRNA (miR)-124-5p/Neuropeptid Y (NPY)-Achse bei Depressionen aufzuklären. Sprague-Dawley-Ratten wurden durch chronischen unvorhersehbaren milden Stress (CUMS) zu Depressionsmodellen induziert. Depressive Ratten erhielten Injektionen mit inhibiertem HDAC1 oder unterdrücktem miR-124-5p, um deren Rolle bei Körpergewicht, Lern- und Gedächtnisleistungen, oxidativem Stress, Entzündungen im Serum und Neurotransmitterexpression im Hippocampus zu untersuchen. Die Expression von miR-124-5p, HDAC1 und NPY im Hippocampus wurde gemessen. Die Wechselwirkungen zwischen miR-124-5p, HDAC1 und NPY wurden ebenfalls bestätigt. Im Hippocampus depressiver Ratten wurden erhöhte miR-124-5p- und HDAC1- sowie erniedrigte NPY-Expressionsniveaus gefunden. Die Inhibition von miR-124-5p oder die Suppression von HDAC1 verbesserten Lern- und Gedächtnisleistungen und erhöhten das Körpergewicht depressiver Ratten. Der Knockdown von miR-124-5p oder die Inhibition von HDAC1 unterdrückten oxidativen Stress und Entzündungen und förderten die Neurotransmitterexpression depressiver Ratten. HDAC1 vermittelte miR-124-5p zur Regulation von NPY. Der Knockdown von NPY hob die schützenden Effekte der inhibierten miR-124-5p bei depressiven Ratten auf. Unsere Studie zeigt, dass die Suppression entweder von miR-124-5p oder HDAC1 NPY hochreguliert, um Gedächtnis und Lernfähigkeit bei depressiven Mäusen zu verbessern, was das bestehende Wissen über Depressionen aktualisieren und einen neuen Referenzpunkt für die Behandlung von Depressionen liefern könnte.

Einleitung

Depression bezeichnet eine schwere, disableisierende Psychose, die weltweit erhebliche ökonomische Belastungen und soziale Folgen verursacht [1]. Depression ist durch physiologische, kognitive und verhaltensbezogene Veränderungen gekennzeichnet, die die allgemeine Gesundheit der Patienten bedrohen [2]. Die zugänglichen Behandlungen für Depressionen haben sich mit der Anwendung von Ketamin als schnell wirksames Antidepressivum und der Verfeinerung von Geräten, die gezielt die Aktivität neuronaler Subpopulationen ansprechen können, weiterentwickelt [3]. Zudem sind vielseitige Nanoarchitekturen wie Kohlenstoffpunkte für neurologische Störungen anwendbar [4]. Unzureichende Behandlung von Depressionen kann jedoch zu schlechter Leistung, Verhaltensstörungen, körperlichen Erkrankungen, Substanzmissbrauch und sogar Suizid führen [5]. Daher besteht ein dringender Bedarf an der Entdeckung innovativer Wirkstoffe zur Behandlung von Depressionen.

Es ist bereits dokumentiert, dass der microRNA (miR)-124-Spiegel im Plasma bei Depressionen und durch Antidepressiva ansteigt [6]. Während CUMS-induzierter Depression zeigt die miR-124-Expression im Hippocampus dynamische Variationen, was auf unterschiedliche pathologische Veränderungen in verschiedenen Stadien der Depression hinweist [7]. Darüber hinaus ist miR-124 ein Kandidat zur Verbesserung depressiver Verhaltensweisen bei majorer depressiver Störung [8]. Auch die Suppression von miR-124 dient als Antidepressivum im präfrontalen Kortex, wie durch attenuierte depressionsähnliche Verhaltensweisen bei Mäusen belegt [9]. Histondeacetylase 1 (HDAC1) ist ein Mediator von miR-124 [10], der einen Multi-Protein-Komplex für transkriptionelle Regulation und epigenetische Modifikation bildet [11]. Meines Wissens fördert eine Beeinträchtigung der HDAC1-Aktivität Resilienz bei majorer depressiver Störung [12]. Zudem kann die Suppression von HDAC1 im Gehirn Stimmungsstörungen und andere neuroplastisch veränderte Hirnerkrankungen verbessern [13]. HDAC-Inhibitoren könnten angstähnliches und alkoholtrinkendes Verhalten attenuieren und die NPY-Expression erhöhen [14]. Auch eine Beeinträchtigung der HDAC-Aktivität kann zu einer Erhöhung der NPY-Expression im zentralen Kern der Amygdala und im medialen Kern der Amygdala führen [15]. NPY ist ein hypothalamisches orexigenes Neuropeptid, das ausreicht, um Angst, soziale Störungen und depressive Symptome zu verhindern [16]. Darüber hinaus wurde belegt, dass NPY und seine Rezeptoren entzündungshemmende und antidepressive Effekte in lipopolysaccharid-induzierten Depressionsrattenmodellen haben [17]. Insgesamt ist das kombinierte Zusammenspiel der HDAC1/miR-124-5p/NPY-Achse bei Depressionen unklar. Daher beabsichtigt diese Studie, den Mechanismus dieser Achse aufzuklären, um einen therapeutischen Kandidaten für die Depressionsbehandlung zu untersuchen.

Materialien und Methoden

Ethik-Erklärung

Die in dieser Studie durchgeführten Tierversuche entsprachen den Anforderungen der tierexperimentellen Ethik des Ersten Affiliierten Krankenhauses der Harbin Medical University. Die Experimente wurden optimiert, um die Haltungsbedingungen der Versuchstiere zu verbessern, die Anzahl der verwendeten Tiere zu reduzieren und Tierleid zu lindern.

Versuchstiere

Sprague-Dawley (SD) männliche Ratten spezifisch pathogenfreier (SPF) Qualität, Gewicht 200–220 g, wurden vom Tierforschungszentrum, Erstes Affiliiertes Krankenhaus der Harbin Medical University (Harbin, China) bereitgestellt. Die Ratten wurden in einer SPF-Umgebung (22–24 °C, 60–64 % Luftfeuchtigkeit, 12-h Licht-/Dunkelzyklus) gehalten. Außer während der Modellierung und zu anderen spezifischen Zeitpunkten hatten die Ratten freien Zugang zu Wasser und Futter.

Rattengruppierung und Modellentstehung

Die modellierten Ratten wurden randomisiert in 8 Gruppen (n = 10) eingeteilt: Normalgruppe (Ratten ohne Behandlung), CUMS-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten), sh-Negativkontrolle (NC)-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten, injiziert mit sh-HDAC1-Lentivirus NC), sh-HDAC1-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten, injiziert mit sh-HDAC1-Lentivirus), anti-miR-NC-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten, injiziert mit anti-miR-124-5p-Lentivirus NC), anti-miR-124-5p-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten, injiziert mit anti-miR-124-5p-Lentivirus), anti-miR-124-5p + sh-NC-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten, injiziert mit anti-miR-124-5p-Lentivirus und sh-NPY-Lentivirus NC) und anti-miR-124-5p + sh-NPY-Gruppe (CUMS-induzierte Depressionsratten, injiziert mit anti-miR-124-5p-Lentivirus und sh-NPY-Lentivirus).

CUMS-induzierte Depressionsrattenmodelle wurden nach Willners Methode [18] etabliert. Ratten der Normalgruppe erhielten Futter und Wasser ohne Reize, während Ratten der anderen 7 Gruppen 35 Tage lang CUMS in Einzelkäfigen erhielten. Diese Ratten wurden durch Eisschwimmen bei 4 °C für 5 min in einem Behälter (30 cm Wassertiefe), Tag-Nacht-Inversion (Ratten 12 h tagsüber im Dunkeln und 12 h nachts in hellem, durch Glühlampen beleuchtetem Raum), Schwanzklemmung mit einer Schwalbenschwanzklemme für 30 s, 1-min-Schütteln, 24-h Nahrungs- und Wasserentzug, 30-min Ultraschallstimulation (50 Hz), feuchte Einstreu und Klimaanlage bei 17 °C stimuliert. Täglich wurde zufällig einer dieser Reize angewendet, und derselbe Reiz wurde insgesamt nicht mehr als 5-mal angewendet.

Ratten wurden mit 2 % Pentobarbitalnatrium (50 mg/kg) narkotisiert und bilateral in den Hippocampus (anteroposteriorer Durchmesser = 4,8 mm, mediolateraler Abstand = ± 2,5 mm, Abstand zwischen Hinterhauptbein und vorderer Fontanelle = −3,5 mm) mit Lentivirus mit 1 µL/min mittels Hamilton-Mikrospritze mit 26-G-Nadel injiziert. Die Nadel wurde 5 min an der Injektionsstelle belassen, um Reflux zu verhindern. Die Schädeldächer wurden mit Knochenwachs versiegelt, die Inzisionen genäht, und die Ratten erholten sich 7 Tage [19]. sh-HDAC1-Lentivirus und dessen NC, anti-miR-124-5p-Lentivirus und dessen NC sowie sh-NPY und dessen NC (Titer: 10⁸ TU/mL) wurden von GenePharma Co. Ltd. (Shanghai, China) bezogen.

Verhaltenstests

Ratten wurden am Tag vor CUMS-Modellierung (Tag 0), nach CUMS-Modellierung (Tag 36) und nach Lentivirus-Interferenz (Tag 52) gewogen.

Der Open-Field-Test (OFT) konnte das autonome und explorative Verhalten von Ratten in einer neuen Umgebung erfassen, was häufig zur Bewertung depressiver Verhaltensweisen verwendet wurde. Der Test erfolgte in einer schwarzen Holz-Open-Field-Box (100 cm × 100 cm × 50 cm) mit einem Videotracking-System über der Box zur Aufzeichnung der Rattenaktivitäten. Der Boden der Box war durch weiße Linien in 25 Gitter (20 cm × 20 cm) unterteilt. Die Ratten wurden in einem vordefinierten zufälligen order in das zentrale Gitter gesetzt, und die Anzahl der Gitterüberquerungen (Ratte betritt ein Gitter mit Gliedmaßen oder beiden Vorderbeinen und einem Hinterbein) sowie die Häufigkeit des Aufrichtens (Ratte hebt Vorderbeine und steht aufrecht mit einem Hinterbein) wurden vom Videotracking-System aufgezeichnet. Der Test wurde in einer ruhigen, gedämpften Innenumgebung durchgeführt. Nach jedem Test wurde die Open-Field-Box mit 75 % Alkohol gereinigt, um Gerüche zu entfernen.

Anhedonie war eines der entscheidenden Symptome der Depression. Der Saccharosepräferenztest (SPT) konnte depressionsähnliche Verhaltensweisen der Ratten bewerten. Vor dem SPT erhielt jede Ratte 24 h lang 2 Flaschen Zuckerwasser (1 % Saccharose, w/w) und anschließend 24 h lang 1 Flasche steriles Wasser und 1 Flasche Zuckerwasser. Danach wurde der Saccharosepräferenzprozentsatz (SPP) der Ratten wie folgt bestimmt: Nach 23-h Nahrungs- und Wasserentzug durften die Ratten 30 min lang an 1 Flasche steriles Wasser und 1 Flasche Zuckerwasser (1 % Saccharose). Nach 1 h wurde die Position der beiden Flaschen vertauscht, und die Ratten hatten weitere 30 min freien Zugang. Während dieser 1 h wurde der Verbrauch (mL) beider Flaschen gemessen und der SPP berechnet: SPP = Zuckerwasserkonsum / (Zuckerwasserkonsum + steriles Wasserkonsum) × 100 %.

Der Morris-Wasserlabyrinth-Test (MWM) wurde breit angewendet, um die räumlichen Lern- und Gedächtnisleistungen von Ratten zu bewerten. Der MWM-Test wurde in einem kreisförmigen Wassertank (150 cm Durchmesser, 60 cm Höhe) mit 40 cm Wassertiefe durchgeführt. Die Wassertemperatur wurde bei 22 ± 1 °C gehalten und das Wasser mit ungiftiger, leicht zu reinigender Farbe schwarz gefärbt. Tank und Wasseroberfläche wurden in 4 Quadranten (SO, SW, NW, NO) unterteilt, wobei jeder Quadrant mit einem entsprechenden, leuchtend gefärbten Symbol besonderer Form an der Innenwand dekoriert war. Die Zielplattform war eine kreisförmige transparente Plattform (11 cm Durchmesser), im Zentrum des NO-Quadranten positioniert und 1,5 cm unter der Wasseroberfläche versenkt. Ein Videotracking-System wurde über der Tankmitte installiert, um Schwimmgeschwindigkeit, Pfad und die Zeit zu erfassen, die Ratten benötigten, um die Zielplattform zu erreichen und in Quadranten zu schwimmen. Ratten wurden in zufälliger Reihenfolge aus 4 Quadranten ins Wasser gesetzt und durften 60 s lang erkunden und die Zielplattform besteigen. Die Zeit bis zum Erreichen der Plattform wurde als Fluchtlatenz aufgezeichnet. Wenn Ratten die Zielplattform innerhalb von 60 s nicht erreichten, wurden sie geführt und die Fluchtlatenz als 60 s aufgezeichnet. Nach jedem Test durften die Ratten 15 s auf der Zielplattform verbleiben, und das Training erfolgte 4-mal täglich für 5 Tage. Die finale Fluchtlatenz war der Mittelwert der Fluchtlatenzen vom 3.–5. Tag. Am 6. Tag des MWM-Tests wurde ein Raumerkundungstest durchgeführt. Die Zielplattform wurde aus dem Wassertank entfernt, und die Ratten stiegen vom SW-Quadranten ins Wasser. Die Zeit, die Ratten innerhalb von 60 s im NO-Quadranten schwammen, wurde als Raumerkundungszeit aufgezeichnet.

Der Zeitplan dieses Experiments ist in Abb. 1 dargestellt.

Abb. 1: Chronologie der vorliegenden Studie.

Probenentnahme

Einen Tag nach dem letzten MWM-Test wurden die Ratten euthanasiert und intrapitoneal mit 2 % Pentobarbitalnatrium (50 mg/kg) injiziert. Die Brusthöhle wurde geöffnet, um Herzblut mit einer Spritze zu entnehmen, welches 3-mal bei 3500 min⁻¹ für 15 min zentrifugiert wurde, und der Überstand bei −20 °C gelagert. Nach der Blutentnahme wurde ein Katheter vom linken Ventrikel zur Aorta eingeführt, und 500 mL physiologische Kochsalzlösung wurden perfundiert, um das gesamte Blut auszuspülen. Hippocampusgewebe wurden entnommen, in 1,5-mL-Zentrifugenröhrchen gegeben, gewogen und bei −80 °C gelagert. Ein Teil des Hippocampus wurde mit 4 % Paraformaldehyd für 2 h fixiert, mit Gradientensucrose dehydriert und in Paraffin eingebettet.

Detektion oxidativer Stress- und Entzündungsmarker

Das Serum wurde aufgetaut zum Nachweis von Superoxiddismutase (SOD), Malondialdehyd (MDA), Glutathion (GSH), Interleukin (IL)-1β, Tumornekrosefaktor-α (TNF-α) und Stickstoffmonoxid (NO) Konzentration. Kits für SOD, MDA und GSH stammten vom Beyotime Institute of Biotechnology (Shanghai, China), während ELISA-Kits für IL-1β, TNF-α und NO vom NanJing JianCheng Bioengineering Institute (Nanjing, China) bezogen wurden.

Hämatoxylin-Eosin (HE)-Färbung

Die Paraffinschnitte wurden entwaxt, mit Ethanol hydratisiert, mit destilliertem Wasser gespült und 20 min mit Hämatoxylin-Lösung gefärbt. Anschließend wurden die Schnitte mit Leitungswasser gespült, bis sie blau wurden. Dann wurden die Schnitte für 10 s in 1 % Ethanolsäure-Lösung gelegt, mit Leitungswasser gespült und mit Ethanol dehydratisiert, worauf 2 min Eosin-Färbung, Dehydratisierung mit hochkonzentriertem Alkohol und Permeabilisierung in Xylol folgte. Schließlich wurden die Schnitte deckglasiert und unter einem biologischen Mikroskop betrachtet.

Neurotransmitter-Expressionsnachweis

Hippocampusgewebe wurden gewogen und in physiologischer Kochsalzlösung (100 µL/10 mg) per Ultraschall homogenisiert. Das Homogenat wurde 30 min bei 4 °C belassen, bei 12.000 min⁻¹ (4 °C) für 3 min zentrifugiert, um den Überstand zu gewinnen. Die Proteinkonzentration des Überstands wurde mit einem Bicinchonsäure (BCA)-Proteinnachweis-Kit (CWBIO, Peking, China) bestimmt, und die Expressionsniveaus von Noradrenalin (NE), Serotonin (5-HT) und Dopamin (DA) mittels ELISA-Kits. NE-, 5-HT- und DA-ELISA-Kits stammten von Liweiping Biotechnology Co., Ltd. (Peking, China).

Reverse-Transkriptions-Quantitative Polymerase-Kettenreaktion (RT-qPCR)

RNA wurde aus Hippocampusgewebe mit einem RNA-Extraktionskit (Promega, Madison, WI, USA) isoliert, und Konzentration und Reinheit der RNA wurden mit einem UV-Spektrophotometer bestimmt. Gemäß den Anweisungen des Reverse-Transkriptionskits (DRR047S, Takara, Dalian, China) wurde die RNA in komplementäre DNA (cDNA) reverse transkribiert. mRNA wurde mittels GoldScript One-Step RT-PCR Kit (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) in cDNA reverse transkribiert, während miRNA mittels Hairpin-it™ miRNA Quantitative Detection Kit (GenePharma) verarbeitet wurde. RT-qPCR-Nachweiskit (Promega) wurde angewendet, um HDAC1-, miR-124-5p- und NPY-Expression im Gewebe zu detektieren. U6 diente als interner Control für miR-124-5p, β-Actin für HDAC1 und NPY. PCR-Primer wurden von Sangon Biotech Co., Ltd. (Shanghai, China) bezogen (Tabelle 1). Die relative Expression der Zielgene wurde nach der 2⁻ΔΔCt-Methode berechnet.

Western-Blot-Analyse

Hippocampusgewebe wurden auf Eis zerkleinert und mit Radio-Immunpräzipitationsassay-Lysepuffer (Beijing Solarbio Science & Technology Co. Ltd., Peking, China) lysiert, um Protein zu extrahieren. Die Proteinkonzentration wurde nach der BCA-Methode bestimmt. Gesamtprotein (50 µg) wurde mit 5× Natriumdodecylsulfat (SDS)-Ladepuffer im Verhältnis 1:4 versetzt und 5 min in einem kochenden Wasserbad erhitzt. Anschließend wurde das Protein einer SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese unterzogen, auf eine Membran elektroblottet und 1 h mit 5 % Milch blockiert. Danach wurde das Protein mit Primärantikörpern gegen HDAC1 (1:1000, Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA), NPY (1:800, NeoMakers, Fremont, California, USA) und β-Actin (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, UK) über Nacht inkubiert und mit Peroxidase-markiertem Sekundärantikörper nachgewisen. Die Membran wurde durch verstärkte Chemilumineszenz entwickelt, und die optische Dichte wurde mit der Quantity One Grauwertanalyse-Software berechnet. Die Proteinexpression des Zielgens wurde als Verhältnis des Grauwerts zum β-Actin-Grauwert ausgedrückt.

Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP)-Assay

Der ChIP-Assay wurde gemäß den Anweisungen des EZ-ChIP-Kits (Millipore, Bedford, MA, USA) durchgeführt. HEK293T-Zellen wurden 10 min mit 1 % Formaldehyd inkubiert und mit Glycin beendet. Anschließend wurden die Zellen bei 2000 min⁻¹ für 5 min zentrifugiert und mit SDS-Lysepuffer für Ultraschallbehandlung versetzt. Zentrifugiert bei 10.000 g bei 4 °C für 10 min, wurden die Zellen (100 µL) mit 900 µL ChIP-Dilutionspuffer, 20 µL 50× PIC und 60 µL Protein-A-Agarose/Lachs-Sperma-DNA bei 4 °C für 1 h inkubiert und 10 min stehen gelassen. Die Präzipitate wurden bei 700 min⁻¹ für 1 min zentrifugiert, wobei 20 µL als Input dienten. Ein Röhrchen erhielt HDAC1-Antikörper (1 µL) und Immunglobulin-G-Antikörper, das andere Röhrchen keinen Antikörper. Die Proben in den beiden Röhrchen wurden über Nacht inkubiert, eluiert und de-kreuzvernetzt. Nach DNA-Rückgewinnung wurde die Probe per RT-qPCR getestet.

Dual-Luciferase-Reportergen-Assay

Eine Bioinformatik-Website (https://cm.jefferson.edu/rna22/Precomputed/) analysierte die Bindungsstellen von miR-124-5p und NPY. NPY-Wildtyp (WT) und NPY-Mutant (MUT) Plasmide wurden von Huayueyang Biotechnology Co., Ltd. (Peking, China) erzeugt. In Kombination mit Mimik-NC oder miR-124-5p-Mimik wurden die Plasmide in HEK293T-Zellen transfiziert. Die Zell-Luciferase-Aktivität wurde mit dem Luciferase-Nachweis-Kit (BioVision) und dem Glomax20/20-Luminometer (Promega) bestimmt.

Statistische Analyse

SPSS 21.0 Statistiksoftware (IBM Corp. Armonk, NY, USA) wurde für die Datenanalyse genutzt. Die Ergebnisse wurden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt. Vergleiche zwischen zwei Gruppen wurden mit dem t-Test geprüft. Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden durch einseitige Varianzanalyse (ANOVA) evaluiert, worauf paarweise Vergleiche mittels Tukeys Post-hoc-Test folgten. P stellte beidseitige Tests dar, und P < 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet.

Ergebnisse

Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p erhöht das Gewicht depressiver Ratten

Ratten wurden 1 Tag vor CUMS-Modellierung (Tag 0), 1 Tag nach Modellierungsende (Tag 36) und 7 Tage nach Lentivirus-Interferenz (Tag 52) gewogen. Vor der Modellierung wurde kein Unterschied im Körpergewicht der Ratten jeder Gruppe festgestellt (alle P > 0,05). Nach der Modellierung nahm das Rattengewicht in der CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe, sh-HDAC1-Gruppe, anti-miR-NC-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe im Vergleich zur Normalgruppe ab (alle P < 0,05). Kein Unterschied wurde im Rattengewicht zwischen CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe, sh-HDAC1-Gruppe, anti-miR-NC-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe festgestellt (alle P > 0,05). Nach Interferenz nahm das Rattengewicht in der CUMS-Gruppe im Vergleich zur Normalgruppe ab (alle P < 0,05). Kein Unterschied bestand im Rattengewicht zwischen CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe (alle P > 0,05). Das Rattengewicht stieg in der sh-HDAC1-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe relativ zu ihren NC-Gruppen an (beide P < 0,05), was darauf hindeutet, dass die Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p das Gewicht depressiver Ratten erhöhte (Abb. 2a).

Abb. 2: Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p erhöht Gewicht und verbessert Lern- und Gedächtnisleistungen depressiver Ratten. a Effekte der Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p auf das Körpergewicht depressiver Ratten; b SPP vor und nach Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p; c Häufigkeit der Gitterüberquerung im OFT vor und nach Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p; d Häufigkeit des Aufrichtens im OFT vor und nach Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p; e Fluchtlatenz im MWM-Test vor und nach Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p; f Raumerkundungszeit im MWM-Test vor und nach Inhibition von HDAC1 oder miR-124-5p; n = 10; a P < 0,05 vs. Normalgruppe; b P < 0,05 vs. sh-NC-Gruppe; c P < 0,05 vs. anti-miR-NC-Gruppe. Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden durch einseitige ANOVA evaluiert, paarweise Vergleiche durch Tukeys Post-hoc-Test.

Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p verbessert Lern- und Gedächtnisleistungen bei depressiven Ratten

SPT, OFT und MWM-Test wurden angewendet, um SPP, Häufigkeit der Gitterüberquerung und des Aufrichtens sowie Fluchtlatenz und Raumerkundungszeit zu detektieren. Es zeigte sich (Abb. 2b–f), dass vor Interferenz im Vergleich zur Normalgruppe SPP, Häufigkeit der Gitterüberquerung, Häufigkeit des Aufrichtens und Raumerkundungszeit abnahmen, während die Fluchtlatenz in der CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe, sh-HDAC1-Gruppe, anti-miR-NC-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe zunahm (alle P < 0,05), was die Entwicklung depressionsähnlicher Verhaltensweisen bei Ratten nahelegt. Es gab keinen Unterschied in SPP, Häufigkeit der Gitterüberquerung, Häufigkeit des Aufrichtens, Raumerkundungszeit und Fluchtlatenz zwischen CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe, sh-HDAC1-Gruppe, anti-miR-NC-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe (alle P > 0,05). Nach Interferenz stiegen im Vergleich zur sh-NC-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe SPP, Häufigkeit der Gitterüberquerung, Häufigkeit des Aufrichtens und Raumerkundungszeit an, während die Fluchtlatenz in der sh-HDAC1-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe abnahm (alle P < 0,05). Kein Unterschied wurde in SPP, Häufigkeit der Gitterüberquerung, Häufigkeit des Aufrichtens, Raumerkundungszeit und Fluchtlatenz zwischen CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe beobachtet (alle P > 0,05), was darauf hindeutet, dass das Stilllegen von HDAC1 oder die Suppression von miR-124-5p depressionsähnliche Verhaltensweisen attenuieren und Lern- und Gedächtnisleistungen bei Ratten verbessern konnte.

Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p attenuiert pathologische Neuronenschäden bei depressiven Ratten

Die Beobachtung hippocampaler Läsionen durch HE-Färbung (Abb. 3a) zeigte, dass die ordentlich angeordneten Neuronen im Hippocampus der Normalgruppe klare Morphologie, normale Struktur, dichte Schichten, klare Zellkerne und offensichtliche Nukleolen aufwiesen. Die Neuronen der Ratten in der CUMS-Gruppe waren geschrumpft, verringert in der Anzahl und lose angeordnet mit ungleichmäßig verteiltem Chromatin und verdünnten Schichten. Ratten in der sh-NC- und anti-miR-NC-Gruppe zeigten die gleiche Situation wie die CUMS-Gruppe. Ratten in der sh-HDAC1- und anti-miR-124-5p-Gruppe zeigten im Vergleich zu ihren NC-Gruppen erhöhte Neuronen in Ordnung und attenuierte Schäden. Es wurde angezeigt, dass der Knockdown von HDAC1 oder die Inhibition von miR-124-5p hippocampale Läsionen bei depressiven Ratten linderte.

Abb. 3: Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p attenuiert pathologische Hippocampus-Schäden und reguliert Neurotransmitterexpression hoch bei depressiven Ratten. a HE-Färbung hippocampaler Läsionen depressiver Ratten; b ELISA der NE-Expression in Hippocampusgeweben; c ELISA der 5-HT-Expression in Hippocampusgeweben; d ELISA der DA-Expression in Hippocampusgeweben; n = 6; a P < 0,05 vs. Normalgruppe; b P < 0,05 vs. sh-NC-Gruppe; c P < 0,05 vs. anti-miR-NC-Gruppe. Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden durch einseitige ANOVA evaluiert, paarweise Vergleiche durch Tukeys Post-hoc-Test.

Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p reguliert Neurotransmitterexpression hoch bei depressiven Ratten

Depression stand in Verbindung mit Neurotransmitterstörungen im Gehirn. Daher wurden die Spiegel von DA, NE und 5-HT im Rattenhippocampus per ELISA gemessen. Die Ergebnisse zeigten (Abb. 3b–d), dass im Vergleich zur Normalgruppe reduzierte DA-, NE- und 5-HT-Spiegel in Ratten der CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe, sh-HDAC1-Gruppe, anti-miR-NC-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe gefunden wurden (alle P < 0,05). Kein Unterschied wurde in der Neurotransmitterexpression zwischen CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe festgestellt (alle P > 0,05). Relativ zur sh-NC- und anti-miR-NC-Gruppe stiegen DA-, NE- und 5-HT-Spiegel in Ratten der sh-HDAC1- und anti-miR-124-5p-Gruppe an (alle P < 0,05), was impliziert, dass die Downregulation von HDAC1 oder die Reduktion von miR-124-5p die Spiegel von DA, NE und 5-HT im Hippocampus depressiver Ratten hochregulieren konnte.

Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p unterdrückt oxidativen Stress und Entzündung bei depressiven Ratten

Oxidativer Stress-bezogene und entzündliche Faktorexpression im Serum wurden gemessen. Bezüglich der Normalgruppe waren SOD- und GSH-Aktivitäten beeinträchtigt, während MDA, IL-1β, TNF-α und NO-Spiegel in den anderen Depressionsmodellgruppen erhöht waren (alle P < 0,05). SOD- und GSH-Aktivitäten sowie MDA-, IL-1β-, TNF-α- und NO-Spiegel zeigten zwischen CUMS-Gruppe, sh-NC-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe keinen Unterschied (alle P > 0,05). In Relation zur sh-NC-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe wurde ein Anstieg der SOD- und GSH-Aktivitäten und eine Abnahme der MDA-, IL-1β-, TNF-α- und NO-Spiegel in der sh-HDAC1-Gruppe und anti-miR-124-5p-Gruppe festgestellt (alle P < 0,05) (Abb. 4a–f), was anzeigt, dass die Depletion von HDAC1 oder die Downregulation von miR-124-5p oxidativen Stress und Entzündung bei depressiven Ratten lindern konnte.

Abb. 4: Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p unterdrückt oxidativen Stress und Entzündung bei depressiven Ratten. a–c Effekt der Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p auf SOD-, MDA- und GSH-Konzentration im Serum depressiver Ratten; d–f Effekt der Inhibition von entweder HDAC1 oder miR-124-5p auf IL-1β-, TNF-α- und NO-Konzentration im Serum depressiver Ratten; n = 10; a P < 0,05 vs. Normalgruppe; b P < 0,05 vs. sh-NC-Gruppe; c P < 0,05 vs. anti-miR-NC-Gruppe. Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden durch einseitige ANOVA evaluiert, paarweise Vergleiche durch Tukeys Post-hoc-Test.

HDAC1 vermittelt miR-124-5p zur Regulation von NPY

RT-qPCR und Western-Blot-Analyse wurden zur Detektion von HDAC1, miR-124-5p und NPY im Hippocampus eingesetzt. Es zeigte sich (Abb. 5a, b), dass im Vergleich zur Normalgruppe HDAC1 und miR-124-5p in der CUMS-Gruppe erhöht und NPY erniedrigt waren (alle P < 0,05). HDAC1-, miR-124-5p- und NPY-Expression zeigten keine Variationen in der CUMS-Gruppe und sh-NC-Gruppe (alle P > 0,05). Relativ zur sh-NC-Gruppe zeigte die sh-HDAC1-Gruppe verringerte HDAC1- und miR-124-5p- sowie erhöhte NPY-Expressionsniveaus (alle P < 0,05). Die obigen Befunde deuteten auf die erfolgreiche Lentivirus-Interferenz und die positive Beziehung zwischen miR-124-5p- und HDAC1-Expression hin.

Abb. 5: HDAC1 vermittelt miR-124-5p zur Regulation von NPY. a HDAC1-, miR-124-5p- und NPY-mRNA-Expression in Hippocampusgeweben nach Inhibition von HDAC1 per RT-qPCR (n = 6); b HDAC1- und NPY-Protein-Expression in Hippocampusgeweben nach Inhibition von HDAC1 per Western-Blot-Analyse (n = 6); c MiR-124-5p- und NPY-mRNA-Expression in Hippocampusgeweben nach Inhibition von miR-124-5p per RT-qPCR (n = 6); d NPY-Protein-Expression in Hippocampusgeweben nach Inhibition von miR-124-5p per Western-Blot-Analyse (n = 6); a P < 0,05 vs. Normalgruppe; c P < 0,05 vs. sh-NC-Gruppe. Vergleiche zwischen mehreren Gruppen wurden durch einseitige ANOVA evaluiert, paarweise Vergleiche durch Tukeys Post-hoc-Test.

Ebenso wurden miR-124-5p- und NPY-Expression nach miR-124-5p-Suppression detektiert, mit den Ergebnissen (Abb. 5c, d), die zeigten, dass im Vergleich zur Normalgruppe erhöhte miR-124-5p- und reduzierte NPY-Werte in der CUMS-Gruppe vorlagen (beide P < 0,05). Im Gegensatz dazu tendierte die anti-miR-124-5p-Gruppe zu verringerter miR-124-5p- und erhöhter NPY-Expression relativ zur anti-miR-NC-Gruppe (beide P < 0,05). Kein Unterschied wurde in der miR-124-5p- und NPY-Expression in der CUMS-Gruppe und anti-miR-NC-Gruppe erkannt (beide P > 0,05). Die Ergebnisse wiesen auf die erfolgreiche Lentivirus-Interferenz und die negative Verbindung zwischen NPY und miR-124-5p hin.

Der ChIP-Assay diente dazu zu testen, ob HDAC1 an den miR-124-5p-Promotor binden kann, und die Ergebnisse zeigten (Abb. 6a, b), dass HDAC1 nur mit dem miR-124-5p-Promotor assoziiert war (P < 0,001), was anzeigt, dass HDAC1 miR-124-5p direkt regulieren konnte.

Abb. 6: HDAC1 bindet an den Promotor von miR-124-5p. a Bindehäufigkeit von HDAC1 und miR-124-5p-Promotorregion in HEK293T-Zellen per ChIP-Assay (n = 3); b Bindehäufigkeit von HDAC1 und nicht-verwandten Intergenregionen in HEK293T-Zellen per ChIP-Assay (n = 3); c MiR-124-5p- und NPY-Bindestelle per Bioinformatik-Software-Website; d Zielbeziehung zwischen miR-124-5p und NPY per Dual-Luciferase-Reportergen-Assay (n = 3); Vergleiche zwischen zwei Gruppen wurden mit t-Test geprüft.

Die Zielbeziehung zwischen miR-124-5p und NPY wurde durch RNA22-Tool und Dual-Luciferase-Reportergen-Assay vorhergesagt und verifiziert (Abb. 6c, d). Bezüglich der Co-Transfektion von Zellen mit NPY-3′UTR-WT und Mimik-NC zeigten die Zellen mit Co-Transfektion von NPY-3′UTR-WT und miR-124-5p-Mimik beeinträchtigte Luciferase-Aktivität (P < 0,05). Kein Unterschied wurde in der Luciferase-Aktivität in den Zellen erkannt, die mit NPY-3′UTR-MUT und Mimik-NC bzw. NPY-3′UTR-MUT und miR-124-5p-Mimik co-transfiziert wurden (P > 0,05).

Knockdown von NPY hebt die schützenden Effekte der inhibierten miR-124-5p bei depressiven Ratten auf

Spontane Depletion von NPY und miR-124-5p wurde programmiert, um ihr Zusammenspiel bei depressiven Ratten zu erforschen. Es zeigte sich (Abb. 7a, b), dass ein niedrigerer NPY-Expressionslevel in der anti-miR-124-5p + sh-NPY-Gruppe im Vergleich zur anti-miR-124-5p + sh-NC-Gruppe festgestellt wurde (P < 0,05). Körpergewicht und Verhaltenstests illustrierten (Abb. 7c–f), dass im Vergleich zur anti-miR-124-5p + sh-NC-Gruppe die Ratten in der anti-miR-124-5p + sh-NPY-Gruppe reduziertes Gewicht, SPP, Häufigkeit der Gitterüberquerung, Häufigkeit des Aufrichtens und Raumerkundungszeit mit erhöhter Fluchtlatenz aufwiesen (alle P < 0,05). HE-Färbung der hippocampalen Läsionen zeigte (Abb. 8a), dass im Vergleich zur anti-miR-124-5p + sh-NC-Gruppe die Anzahl der hippocampalen Neuronen reduziert war und hippocampale Neuronen dunkel gefärbt, spärlich und unordentlich in unregelmäßiger Form mit reduzierten Zellschichten in der anti-miR-124-5p + sh-NPY-Gruppe angeordnet waren. Zudem wiesen die Ratten in der anti-miR-124-5p + sh-NPY-Gruppe im Vergleich zur anti-miR-124-5p + sh-NC-Gruppe reduzierte DA-, NE- und 5-HT-Spiegel auf (alle P < 0,05) (Abb. 8b). Außerdem existierten beeinträchtigte SOD- und GSH-Aktivitäten sowie erhöhte MDA-, IL-1β-, TNF-α- und NO-Spiegel in den Ratten der anti-miR-124-5p + sh-NPY-Gruppe versus der anti-miR-124-5p + sh-NC-Gruppe (alle P < 0,05) (Abb. 8c, d). Insgesamt hob der Knockdown von NPY die schützenden Effekte der reprimierten miR-124-5p bei depressiven Ratten auf.

Abb. 7: Knockdown von NPY hebt die Effekte der inhibierten miR-124-5p auf Körpergewicht und Verhaltensfunktion depressiver Ratten auf. a MiR-124-5p- und NPY-mRNA-Expression in Hippocampusgeweben nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY per RT-qPCR (n = 6); b NPY-Protein-Expression in Hippocampusgeweben nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY per Western-Blot-Analyse (n = 6); c Körpergewicht depressiver Ratten nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY (n = 10); d SPP depressiver Ratten nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY (n = 10); e Häufigkeit der Gitterüberquerung und des Aufrichtens nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY (n = 10); f Fluchtlatenz und Raumerkundungszeit nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY (n = 10); Vergleiche zwischen zwei Gruppen wurden mit t-Test geprüft.

Abb. 8: Knockdown von NPY hebt die Effekte der inhibierten miR-124-5p auf hippocampale Schäden depressiver Ratten auf. a HE-Färbung hippocampaler Läsionen von Ratten nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY (n = 6); b ELISA der NE-, 5-HT- und DA-Expression in Hippocampusgeweben von Ratten nach Inhibition sowohl von miR-124-5p als auch NPY (n = 6); c Effekt von inhibiertem NPY und supprimiertem miR-124-5p auf SOD-, MDA- und GSH-Konzentration im Serum (n = 10); d Effekt von inhibiertem NPY und supprimiertem miR-124-5p auf IL-1β-, TNF-α- und NO-Konzentration im Serum (n = 10). Vergleiche zwischen zwei Gruppen wurden mit t-Test geprüft.

Diskussion

Depression ist eine Art psychiatrischer Störung, die eine Vielzahl von Bedingungen mit diversen Symptomen umfasst [20]. Obwohl aufkommende Studien die Rolle von miRNAs bei Depressionen impliziert haben, wurde die präzise Wirkung von miR-124-5p selten untersucht. Daher ist die vorliegende Studie auf ein besseres Verständnis des Mechanismus der miR-124-5p/HDAC1/NPY-Achse bei Depressionen projiziert, mit dem Hauptergebnis, dass das Stilllegen entweder von HDAC1 oder miR-124-5p NPY hochreguliert, um Gedächtnis und Lernfähigkeit depressiver Ratten zu verbessern.

Zunächst entdeckte diese Studie HDAC1-Expression in Hippocampusgeweben mit den Befunden, die eine Erhöhung der HDAC1-Expression nahelegten. Anschließend wurden mit dem Ziel, die funktionellen Rollen von HDAC1 bei depressiven Ratten zu entschlüsseln, Loss-of-Function-Assays durchgeführt, und es wurde offengelegt, dass der Knockdown von HDAC1 das Körpergewicht erhöhte, Lern- und Gedächtnisleistungen verbesserte, pathologische Schäden attenuierte, Neurotransmitterexpression hochregulierte und oxidativen Stress und Entzündung bei depressiven Ratten unterdrückte. Aktuell hat eine Studie eine Erhöhung der HDAC1-Expression in depressionsähnlichen und angstähnlichen Phänotypen, resultierend aus Stress-Nachkommen, impliziert [21]. Zudem ist die Expression von HDAC1 dokumentiert, in der Penumbra bei photothrombotischem Schlaganfall hochreguliert zu sein [22]. Darüber hinaus wird inkorporelle HDAC1-mRNA-Expression in Granular- und Pyramidenzellen bei temporaler Lobusepilepsie gefunden [23]. Hinsichtlich der funktionellen Rolle von HDAC1 wurde berichtet, dass virus-vermittelte Überexpression neuronaler HDAC1 im Hippocampus von Mäusen insbesondere den Verlust kontextueller Angstgedächtnis beeinflusst [24]. Mechanistisch kehren HDAC-Inhibitoren kognitive Defizite um, die in neurodegenerativen Erkrankungen und altersbedingtem Gedächtnisverlust gefunden werden [25]. Tatsächlich wird akzeptiert, dass die HDAC1-Suppression durch Tianeptinalin Neuroplastizität verbessert und Gedächtnis verstärkt [26]. Wie in einer früheren Studie erwähnt, wird geschlossen, dass die Repression von HDAC1 die pathogenen Prozesse inhibiert, die zur Motoneurondegeneration bei Mitochondrienerkrankungen führen [27]. Experimentell ist das Stilllegen von HDAC1 durch 5-Thienyl-substituierte 2-Aminobenzamid-Typen teilweise an der Prävention neuronalen Zelltods in Parkinson-Modellen beteiligt [28]. Gestützt durch diese Forschungen wurden die schützenden Effekte des stillgelegten HDAC1 in Hirnerkrankungen, einschließlich aber nicht beschränkt auf Depression, beobachtet.

Dann entdeckte unsere Studie eine Zielbeziehung zwischen HDAC1 und miR-124-5p, was durch eine frühere Studie gestützt wurde, die nahelegt, dass miR-124-Transkription in der Verantwortung von EVI1 liegt, indem es mit der Deacetylase HDAC1 interagiert [29]. miR-124-5p war das überexprimierte Gen in depressiven Ratten, und der Knockdown von miR-124-5p hatte ähnliche Funktionen wie stillgelegtes HDAC1 bei depressiven Ratten. Tatsächlich gibt es eine Studie, die anzeigt, dass die Expression von miR-124 im Hippocampus von 5 bis 6 Wochen in depressionsähnlichen Verhaltensphänotypen hochreguliert ist [7]. Eine andere Studie hat die Erhöhung der miR-124-Expression bei Frauen mit Kokainkonsumstörung identifiziert [30]. Auch wurde zuvor beschrieben, dass miR-124-3p in gestressten Nagetieren bei majorer depressiver Störung hoch exprimiert ist [31]. Bezüglich der Effekte wird berichtet, dass der Knockdown von miR-124 im präfrontalen Kortex depressionsähnliches Verhalten von Mäusen attenuiert [9]. Darüber hinaus wird angenommen, dass miR-124-Knockdown als Antidepressivum bei chronisch corticosteron-induzierten Gypenosiden bei Mäusen dient [32]. Entnommen einer früheren Studie kann der Knockdown von miR-124 zu verbesserter verhaltensbezogener Suszeptibilität gegenüber einem milderen Stressparadigma führen [33]. Es wird berichtet, dass die Suppression von miR-124 durch Lentivirus-Transfektion im Hippocampus ketamin-induzierte Neurodegeneration in vivo und in vitro schützen kann [34]. Jedenfalls ist die miR-124-5p-Suppression ein aktiver Akteur zur Attenuation von Depression.

Weiterhin wurde die NPY-Expression als durch HDAC1 und miR-124-5p reguliert verifiziert. Die verschlechterten Defizite, assoziiert mit HDAC2 in der Histonacetylierung, könnten mit der verringerten Expression von NPY zusammenhängen und verwendet werden, um angstähnliches und Trinkverhalten zu kontrollieren [14]. NPY war in depressiven Ratten downreguliert, und die Hochregulation von NPY förderte die Erholung von Lern- und Gedächtnisleistungen bei depressiven Ratten. In der Entwicklung depressionsähnlicher Verhaltensweisen manifestieren sich Rattenmodelle mit reduzierter NPY-Expression [17]. Akademisch ist die Expression von NPY belegt, in Mäusen mit Depression abzunehmen [35]. Konsistent sind die oben genannten Studienergebnisse in gewissem Maße mit der bisherigen Literatur identisch.

Die neuartigen Befunde der Studie legten nahe, dass inhibierte miR-124-5p oder supprimiertes HDAC1 Lern- und Gedächtnisleistungen attenuierten und das Körpergewicht depressiver Ratten erhöhten. Zusätzlich unterdrückten Knockdown von miR-124-5p oder Inhibition von HDAC1 oxidativen Stress und Entzündung und förderten Neurotransmitterexpression depressiver Ratten. Zudem vermittelte HDAC1 miR-124-5p zur Regulation von NPY. In den Rettungsexperimenten hob der Knockdown von NPY die schützenden Effekte der inhibierten miR-124-5p bei depressiven Ratten auf.

Fazit

Zusammenfassend hob diese Studie den Effekt der HDAC1/miR-124-5p/NPY-Achse bei Depressionen hervor, mit den Hauptbefunden, die nahelegen, dass inhibierte miR-124-5p oder supprimiertes HDAC1 Lern- und Gedächtnisleistungen attenuierten, das Körpergewicht erhöhten, oxidativen Stress und Entzündung unterdrückten sowie Neurotransmitterexpression bei depressiven Ratten förderten. Die HDAC1/miR-124-5p/NPY-Achse könnte einen Referenzpunkt für die Behandlung neurologischer Störungen bieten, was auch das bestehende Wissen über Depressionen aktualisieren könnte. Allerdings sind weitere Studien noch erforderlich für ein gründliches Verständnis des komplexen Mechanismus der HDAC1/miR-124-5p/NPY-Achse bei Depressionen.

Verfügbarkeit von Daten und Materialien

Nicht anwendbar.

Abkürzungen

miR-124-5p:

MicroRNA-124-5p

HDAC1:

Histondeacetylase 1

NPY:

Neuropeptid Y

CUMS:

Chronischer unvorhersehbarer milder Stress

SD:

Sprague-Dawley

SPF:

Spezifisch pathogenfrei

NC:

Negative Kontrolle

OFT:

Open-Field-Test

SPT:

Saccharosepräferenztest

SPP:

Saccharosepräferenzprozentsatz

MWM:

Morris-Wasserlabyrinth-Test

SOD:

Superoxiddismutase

MDA:

Malondialdehyd

GSH:

Glutathion

IL-β:

Interleukin-β

TNF-α:

Tumornekrosefaktor-α

NO:

Stickstoffmonoxid

ELISA:

Enzyme-linked immunosorbent assay

HE:

Hämatoxylin-Eosin

BCA:

Bicinchonsäure

NE:

Noradrenalin

5-HT:

Serotonin

DA:

Dopamin

RT-qPCR:

Reverse-Transkriptions-Quantitative Polymerase-Kettenreaktion

cDNA:

Komplementäre DNA

SDS:

Natriumdodecylsulfat

ChIP:

Chromatin-Immunpräzipitation

UTR:

Untranslatierte Region

MUT:

Mutantentyp

WT:

Wildtyp

ANOVA:

Einseitige Varianzanalyse